ISTRUZIONE SUPERIORE ED UNIVERSITARIA
Diploma : Diploma di Maturita' Scientifica, 1985.Laurea : Laurea in Scienze Biologiche conseguita presso l'Universita' di Firenze nel luglio 1990 con votazione : 110/110 e lode con encomio. Titolo della tesi: “Purificazione e caratterizzazione di una acilfosfatasi da muscolo scheletrico di tacchino”.
ISTRUZIONE E FORMAZIONE POSTUNIVERSITARIA
Scuola di Specializzazione : Scuola di Specializzazione in Biochimica e Chimica Clinica iniziata nel 1991 e sospesa al secondo anno per la concomitante ammissione al corso di Dottorato di Ricerca (quattro anni). Ripresa poi nel 1995 e terminata con il massimo dei voti nel novembre 1998. Titolo della tesi : “Effetti della pentossifillina sulla sintesi e degradazione di collagene in cellule stellate isolate da fegato umano”.Dottorato di Ricerca in Fisiopatologia Clinica : Dal dicembre 1991 al dicembre 1995 sotto la supervisione del Dott. Massimo Pinzani presso l'Istituto di Medicina Interna dell'Università di Firenze diretto dal Prof. Paolo Gentilini. Conseguimento del titolo di Dottore di Ricerca in data 8/1/1996 con la seguente tesi : “Espressione e regolazione delle binding proteins per gli insulin-like growth factors in cellule stellate perisinusoidali isolate da fegato umano”.Research Fellowship : Dal novembre 1994 al maggio 1996 presso il Dipartimento di Nefrologia dell'Università del Texas Health Science Center diretto dal Prof. Hanna E. Abboud.Postdottorato di Ricerca in Fisiopatologia Clinica: Iniziato nell'agosto 1997 presso l'Istituto di Medicina Interna dell'Università di Firenze, è terminato nell'agosto 1999. Argomento della Ricerca : “Rapporti biologici esistenti tra cellule epatocarcinomatose e la matrice extracellulare che costituisce lo stroma proprio del tumore”.Assegno di Ricerca : Iniziato nel settembre 1999 con il seguente progetto : “Meccanismi di segnalazione intracellulare dell’insulin-like growth factor I in cellule stellate umane” e terminato nel settembre 2000.Contratto triennale come coordinatore tecnico, categoria EP1: Iniziato il primo settembre 2000 e terminato nell’ottobre 2002. Assunzione come ricercatore a tempo indeterminato: dal 1° novembre 2002.Assunzione come ricercatore di ruolo : dal 1° novembre 2005.
ATTIVITA' DI RICERCA SCIENTIFICA
La Dott.ssa Gentilini ha frequentato dal 1989 al 1991 l'Istituto di Biochimica di Firenze dove ha svolto attività di ricerca presso i laboratori del Prof. A. Berti e Prof. G. Cappugi. Durante questo periodo si e' occupata prevalentemente di un progetto riguardante la purificazione e caratterizzazione dell'enzima acilfosfatasi da muscolo scheletrico di tacchino che e' stato il tema riguardante la sua tesi di laurea.Durante il Dottorato di Ricerca in Fisiopatologia Clinica ha contribuito a vari progetti nell'ambito dello studio della fisiopatologia delle Cellule Stellate Perisinusoidali (CSP) e della patogenesi della fibrosi epatica. In particolare i suoi studi si sono focalizzati su: 1) Regolazione dell'espressione delle subunita' recettoriali per il platelet-derived growth factor (PDGF), da parte del transforming growth factor-beta 1 (TGF-ß1), in CSP umane.2) Espressione e ruolo fisiopatologico-prognostico dell'espressione del platelet-derived growth factor e delle relative subunità recettoriali in corso di attive fibrogenesi epatica.3) Ruolo dell’attivazione della phosphatidylinositol 3- (PI 3- ) kinase nella mitogenesi e chemotassi indotte dal platelet-derived growth factor in CSP umane.4) Regolazione dell'espressione del gene per il procollagene tipo 1 da parte di meccanismi lipoperossidativi e di aldeidi reattive in CSP umane.5) Espressione di endotelina-1 (ET-1) nel fegato umano e cirrotico ed effetti biologici dell'ET-1 in CSP umane.6) Caratterizzazione e regolazione delle insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs) nelle CSP umane.Ha iniziato presso il Department of Medicine, University of Texas at San Antonio, Texas, U.S.A., sotto la diretta supervisione della Dott.ssa Sherry Abboud , un progetto riguardante l’espressione di IGF-I e IGFBPs nel fegato umano normale, cirrotico e neoplastico che è stato terminato in seguito presso il laboratorio di biologia molecolare e cellulare di Medicina Interna di Firenze coordinato dal Prof. M.Pinzani. Svolge tuttora attività di ricerca nel campo del signaling dell’IGF I presso lo stesso laboratorio, soprattutto nell’ambito delle attività di fattore di crescita e di sopravvivenza cellulare svolte da tale citochina.
TECNOLOGIE DI BIOLOGIA MOLECOLARE ACQUISITE
• Purificazione di anticorpi monoclonali e policlonali.• Purificazione di proteine tramite precipitazione con solfato d'ammonio, centrifugazione frazionata, cromatografia a scambio ionico ed esclusione, ed HPLC.• Immunoprecipitazione di proteine ottenute da lisati cellulari.• Quantificazione e separazione su gel di poliacrilamide di proteine cellulari, con successiva identificazione o mediante anticorpi mono o policlonali secondo la metodica di western blot o con ligandi radioattivi secondo la metodica di ligand blot.• Coltivazione di cellule in vitro.• Tecnologie generali di DNA ricombinante: crescita di vettori plasmidici e purificazione di sonde di DNA, ligazione di sonde a vettori diversi e successivo subcloning. Marcatura di tali sonde con fosforo radioattivo.• Purificazione di RNA totale da cellule in coltura e da frammenti di tessuto epatico e successiva separazione su gel di agarosio/formaldeide (metodica Northern) o di urea/poliacrilamide (metodica RNase protection assay). Purificazione di sonde di RNA e marcature con fosforo radioattivo.• Metodologie per lo studio della proliferazione cellulare (incorporazione di timidina triziata) e della chemotassi (migrazione in camere di Boyden modificate).• Metodologie per lo studio della signal transduction, in particolare per lo studio dell'attivazione della mitogen activated protein (MAP) kinase, della PI3 kinase e della protein kinase B.• Metodologie per lo studio dell’apoptosi, in particolare l’espressione dell’attività enzimatica per la Caspase-3 e la regolazione di proteine impiegate nel signaling, quali Bcl-xl e Bad.
Legenda
Dr Alessandra Gentilini
Scientist in experimental hepatology
PERSONAL PARTICULARS
Name : Alessandra Gentilini
Date of birth : July 27, 1966, Chianciano (Siena), Italy
Nationality : Italian
Address : Department of Experimental and Clinical Medicine, University of Florence, Italy. Viale Pieraccini 6, 50139 Firenze, Italy
Tel:00390552758126
Electronic address: alessandra.gentilini@unifi.it.
EDUCATIONAL QUALIFICATIONS
1990 : Master’s Degree in Biological Science, Universita’ di Firenze, Florence, Italy.
1996 : Ph.D in Physiopathology, Università di Firenze, Florence, Italy.
CAREER HISTORY
1990-1991 : First year of School of Specialization in Clinical Chemistry and Biochemistry, Universita’ di Firenze, Italy.
1991-1995 : Graduate student, Ph.D. program in Clinical Pathophysiology, Istituto di Medicina Interna, Universita’ di Firenze, Firenze, Italy.
1995-1996 : Research Fellow at the University of Texas, Health Science Center at San Antonio, San Antonio, Texas.
1995-1997 : Second and third years of School of Specialization in Clinical Chemistry and Biochemistry, Universita’ di Firenze, Italy. Board Certification in 1997.
2002-present: Position as Assistant Professor at Department of Internal Medicine, Center for Research, High Education and Transfer DENOTHE, University of Florence.
2005-present: Molecular biology and hepatology teacher at the University of Florence
HONORS AND AWARDS
1990 : Cum laude thesis with Biological Science Degree.
1997 : Post-graduate grant in Physiopathology.
2005: Collaborator in Prin Grant: RUOLO DELLO STROMA EPATICO (CELLULE STELLATE ATTIVATE) NELLO SVILUPPO DI METASTASI EPATICHE DA COLON CARCINOMA ED ALTRI TUMORI EPITELIALI MEDIANTE LA SINTESI DI ADAM-9 with PI Prof M Pinzani
2009: Collaborator in Prin Grant: Identificazione delle cellule produttrici di monocyte chemoattractant protein-1 e del loro ruolo nella patogenesi del danno epatico in modelli dietetici di steatoepatite non-alcolica With PI Prof F Marra.
2015: Collaborator in AIRC IG grant 2015 on: Stroma-derived signals in the regulation of the biology of cholangiocarcinoma, with PI Prof F Marra.
February 2015: Oral presentation at AISF, Rome.
September 22, 2016: Oral presentation at Liver Gymnasium, Padova.
October 15, 2016: Oral presentation at SIMI, Rome.
2020: PI in Fondazione Cassa di Risparmio di Firenze grant on: Role of CXCR7 Receptor in fibrosis of NASH.
March 2021: Oral presentation at AISF, Rome.
March 21: President of Doctorate Genomec (PhD) thesis, Siena.
April 2021: Board as Prof. Marra’s Associate Faculty Member for Faculty Opinions.
April 2021: Joined the Topical Advisory Panel of Cancers (IF 6,6).
September 2022: Collaborator in PNRR on The tumor immune microenvironment of cholangiocarcinoma in the identification of biomarkers of treatment response and of novel druggable targets for treatment, with PI Prof F Marra
July 2023: Prin as chief of Unit in “Oncostatin M as pro-inflammatory cytokine modulating intrahepatic cholangiocarcinoma progression and tumor-stroma interaction”.
RESEARCH ACTIVITIES
As preparation for the Biological Science Degree thesis, purification and characterization of an acylphosphatase from turkey skeletal muscle.
For Ph.D. program partecipation in various projects directed mainly by M. Pinzani M.D. Ph.D., concerning the role of the Human Hepatic cells (HSCs) in the development of liver fibrosis.
These projects included :
-Effects of PDGF and/or TGF- on HFSC DNA synthesis and TGF- regulation of PDGF receptor expression.
-Role of phosphatidylinositol 3 (PI3)-kinase activation in PDGF induced mitogenesis and chemotaxis in HFSC.
-Regulation of expression of procollagen I mRNA by lipoperoxidative mechanisms in HFSC.
-Endothelin 1 expression in normal and cirrhotic livers and mitogenic effects of Endothelin 1 in HFSC.
As Research Fellow in San Antonio, under the supervision of Sherry Abboud M.D. Ph.D., research activity in a project studying the characterization and regulation of Insulin-like growth factor (IGF)-binding proteins in HFSC. Partecipation in two projects with G.Ghosh Choudhury, Ph.D. studying the involvement of mitogen activated protein (MAP) kinase in glomerular mesangial cells on PI3-kinase dependent chemotaxis and mitogenesis and the involvement of protein kinase C.
Back in Florence research activity in a project studying the profibrogenic action of IGF-I on HSC. Partecipation as collaborator or principal investigator in different projects studying i) the interactions between stromal cells and cholangiocarcinoma and ii) liver fibrosis.
MOLECULAR AND CELL BIOLOGY TECHNIQUES
• Purification of monoclonal and polyclonal antibodies.
• Protein purification by ammonium sulfate precipitation, fractional centrifugation, ion exchange and exclusion chromatography, and HPLC.
• Immunoprecipitation of proteins obtained from cellular lysates.
• Quantification and separation of cellular proteins on polyacrylamide gel, with subsequent identification either by mono or polyclonal antibodies according to the western blot method or with radioactive ligands according to the ligand blot method.
• In vitro cell culture.
• Technologies of recombinant DNA: growth of plasmid vectors and purification of DNA probes, ligation of probes to different vectors and subsequent subcloning. Labeling of probes with radioactive phosphorus.
• Purification of total RNA from cultured cells and liver tissue fragments and subsequent separation on agarose / formaldehyde gel (Northern method) or urea / polyacrylamide (RNase protection assay method). Purification of RNA probes and radioactive labeling.
• Methods for the study of cell proliferation (incorporation of tritiated thymidine) and motility (migration an invasion with modified Boyden chambers).
• Methodologies for the study of signal transduction, in particular for the study of the activation of mitogen activated protein (MAP) kinase, PI3 kinase and protein kinase B.
• Methods for genes silencing by siRNA and shRNA.
PUBLICATIONS
Caligiuri A, Gitto S, Lori G, Marra F, Parola M, Cannito S, Gentilini A. Oncostatin M: From Intracellular Signaling to Therapeutic Targets in Liver Cancer. Cancers (Basel). 2022 Aug 30;14(17):4211. doi: 10.3390/cancers14174211. PMID: 36077744; PMCID: PMC9454586.
Gentilini A, Lori G, Caligiuri A, Raggi C, Di Maira G, Pastore M, Piombanti B, Lottini T, Arcangeli A, Madiai S, Navari N, Banales JM, Di Matteo S, Alvaro D, Duwe L, Andersen JB, Tubita A, Tusa I, Di Tommaso L, Campani C, Rovida E, Marra F. Extracellular Signal-Regulated Kinase 5 Regulates the Malignant Phenotype of Cholangiocarcinoma Cells. Hepatology. 2021 Oct;74(4):2007-2020. doi: 10.1002/hep.31888. Epub 2021 Jul 5.
Caligiuri A, Gentilini A, Pastore M, Gitto S, Marra F. Cellular and Molecular Mechanisms Underlying Liver Fibrosis Regression. Cells. 2021 Oct 15;10(10):2759. doi: 10.3390/cells10102759.
Pastore M, Lori G, Gentilini A, Taddei ML, Di Maira G, Campani C, Recalcati S, Invernizzi P, Marra F, Raggi C.Multifaceted Aspects of Metabolic Plasticity in Human Cholangiocarcinoma: An Overview of Current Perspectives.Cells. 2020 Mar 3;9(3):596. doi: 10.3390/cells9030596. Review
Caligiuri A, Pastore M, Lori G, Raggi C, Di Maira G, Marra F, Gentilini A. Role of Chemokines in the Biology of Cholangiocarcinoma. Cancers (Basel). 2020 Aug 7;12(8):2215. doi: 10.3390/cancers12082215. Review.
Di Maira G, Gentilini A, Pastore M, Caligiuri A, Piombanti B, Raggi C, Rovida E, Lewinska M, Andersen JB, Borgo C, Salvi M, Ottaviani D, Ruzzene M, Marra F. The protein kinase CK2 contributes to the malignant phenotype of cholangiocarcinoma cells. Oncogenesis. 2019 Oct 22;8(11):61. doi: 10.1038/s41389-019-0171-x.
Gentilini A, Caligiuri A, Raggi C, Rombouts K, Pinzani M, Lori G, Correnti M, Invernizzi P, Rovida E, Navari N, Di Matteo S, Alvaro D, Banales JM, Rodrigues P, Raschioni C, Donadon M, Di Tommaso L, Marra F.
CXCR7 contributes to the aggressive phenotype of cholangiocarcinoma cells. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2019 Sep 1;1865(9):2246-2256. doi: 10.1016/j.bbadis.2019.04.020. Epub 2019 May 3.
Gentilini A, Pastore M, Marra F, Raggi C. The Role of Stroma in Cholangiocarcinoma: The Intriguing Interplay between Fibroblastic Component, Immune Cell Subsets and Tumor Epithelium. Int J Mol Sci. 2018 Sep 22;19(10). pii: E2885. doi: 10.3390/ijms19102885. Review.
Gentilini A, Caligiuri A, Provenzano A, Marra F. Novel Aspects in the Pathogenesis of Nonalcoholic Steatohepatitis. Curr Mol Med. 2016;16(8):710-720.doi: 10.2174/1566524016666161021163252. Review.
Caligiuri A, Gentilini A, Marra F. Molecular Pathogenesis of NASH. Int J Mol Sci. 2016 Sep 20;17(9):1575. doi: 10.3390/ijms17091575. Review.
Gentilini A, Rombouts K, Galastri S, Caligiuri A, Mingarelli E, Mello T, Marra F, Mantero S, Roncalli M, Invernizzi P, Pinzani M. Role of the stromal-derived factor-1 (SDF-1)-CXCR4 axis in the interaction between hepatic stellate cells and cholangiocarcinoma. J Hepatol. 2012 Oct;57(4):813-20. doi: 10.1016/j.jhep.2012.06.012. Epub 2012 Jun 19.
Gentilini A, Lottini B. Brogi M, Caligiuri A, Cosmi L, Marra F, Pinzani M. Evaluation of intracellular signalling pathways in response to insulin-like growth factor I in apoptotic-resistant activated human hepatic stellate cells. Fibrogenesis Tissue Repair. 2009 Jan 30;2(1):1. doi: 10.1186/1755-1536-2-1
Zamara E, Novo E, Marra F, Gentilini A, Romanelli RG, Caligiuri A, Robino G, Tamagno E, Aragno M, Danni O, Autelli R, Colombatto S, Dianzani MU, Pinzani M, Parola M. 4-Hydroxynonenal as a selective pro-fibrogenic stimulus for activated human hepatic stellate cells. J Hepatol. 2004 Jan;40(1):60-8. doi: 10.1016/s0168-8278(03)00480-x
Caligiuri A, De Franco RM, Romanelli RG, Gentilini A, Meucci M, Failli P, Mazzetti L, Rombouts K, Geerts A, Vanasia M, Gentilini P, Marra F, Pinzani M. Antifibrogenic effects of canrenone, an antialdosteronic drug, on human hepatic stellate cells. Gastroenterology. 2003 Feb;124(2):504-20. doi: 10.1053/gast.2003.50058
Gentilini P, Vizzutti F, Gentilini A, Zipoli M, Foschi M, Romanelli RG. Update on ascites and hepatorenal syndrome. Dig Liver Dis. 2002 Aug;34(8):592-605. doi: 10.1016/s1590-8658(02)80094-9.. Review
Carloni V, Defranco RM, Caligiuri A, Gentilini A, Sciammetta SC, Baldi E, Lottini B, Gentilini P, Pinzani M.
Cell adhesion regulates platelet-derived growth factor-induced MAP kinase and PI-3 kinase activation in stellate cells. Hepatology. 2002 Sep;36(3):582-91. doi: 10.1053/jhep.2002.35277.
Gentilini P, Vizzutti F, Gentilini A, La Villa G. Ascites and hepatorenal syndrome. Eur J Gastroenterol Hepatol. 2001 Apr;13(4):313-6. doi: 10.1097/00042737-200104000-00003. Review
Failli P, DeFranco RM, Caligiuri A, Gentilini A, Romanelli RG, Marra F, Batignani G, Guerra CT, Laffi G, Gentilini P, Pinzani M. Nitrovasodilators inhibit platelet-derived growth factor-induced proliferation and migration of activated human hepatic stellate cells. Gastroenterology. 2000 Aug;119(2):479-92. doi: 10.1053/gast.2000.9354.
Gentilini A, Marra F, Gentilini P, Pinzani M. Phosphatidylinositol-3 kinase and extracellular signal-regulated kinase mediate the chemotactic and mitogenic effects of insulin-like growth factor-I in human hepatic stellate cells. J Hepatol. 2000 Feb;32(2):227-34. doi: 10.1016/s0168-8278(00)80067-7.
Choudhury GG, Karamitsos C, Hernandez J, Gentilini A, Bardgette J, Abboud HE. PI-3-kinase and MAPK regulate mesangial cell proliferation and migration in response to PDGF. Am J Physiol. 1997 Dec;273(6):F931-8. doi: 10.1152/ajprenal.1997.273.6.F931.
Gentilini A, Feliers D, Pinzani M, Woodruff K, Abboud S. Characterization and regulation of insulin-like growth factor binding proteins in human hepatic stellate cells. J Cell Physiol. 1998 Feb;174(2):240-50. doi: 10.1002/(SICI)1097-4652(199802)174:2<240::AID-JCP11>3.0.CO;2-G.
Marra F, Gentilini A, Pinzani M, Choudhury GG, Parola M, Herbst H, Dianzani MU, Laffi G, Abboud HE, Gentilini P. Phosphatidylinositol 3-kinase is required for platelet-derived growth factor's actions on hepatic stellate cells. Gastroenterology. 1997 Apr;112(4):1297-306. doi: 10.1016/s0016-5085(97)70144-6.
Pinzani M, Marra F, Caligiuri A, DeFranco R, Gentilini A, Failli P, Gentilini P. Inhibition by pentoxifylline of extracellular signal-regulated kinase activation by platelet-derived growth factor in hepatic stellate cells. Br J Pharmacol. 1996 Nov;119(6):1117-24. doi: 10.1111/j.1476-5381.1996.tb16012.x.
Pinzani M, Milani S, Herbst H, DeFranco R, Grappone C, Gentilini A, Caligiuri A, Pellegrini G, Ngo DV, Romanelli RG, Gentilini P. Expression of platelet-derived growth factor and its receptors in normal human liver and during active hepatic fibrogenesis. Am J Pathol. 148(3):785-800, 1996.
Pinzani M, Milani S, De Franco R, Grappone C, Caligiuri A, Gentilini A, Tosti-Guerra C, Maggi M, Failli P, Ruocco C, Gentilini P. Endothelin 1 is overexpressed in human cirrhotic liver and exerts multiple effects on activated hepatic stellate cells. Gastroenterology. 1996 Feb;110(2):534-48. doi: 10.1053/gast.1996.v110.pm8566602.
Failli P, Ruocco C, De Franco R, Caligiuri A, Gentilini A, Giotti A, Gentilini P, Pinzani M. The mitogenic effect of platelet-derived growth factor in human hepatic stellate cells requires calcium influx. Am J Physiol. 1995 Nov;269(5 Pt 1):C1133-9. doi: 10.1152/ajpcell.1995.269.5.C1133.
Pinzani M, Gentilini A, Caligiuri A, De Franco R, Pellegrini G, Milani S, Marra F, Gentilini P. Transforming growth factor-beta 1 regulates platelet-derived growth factor receptor beta subunit in human liver fat-storing cells. Hepatology. 21(1):232-9, 1995.
Parola M, Pinzani M, Casini A, Albano E, Poli G, Gentilini A, Gentilini P, Dianzani MU. Stimulation of lipid peroxidation or 4-hydroxynonenal treatment increases procollagen alpha 1 (I) gene expression in human liver fat-storing cells. Biochem Biophys Res Commun. 1993 Aug 16;194(3):1044-50. doi: 10.1006/bbrc.1993.1927.
Pazzagli L, Ikram UK, Liguri G, Taddei N, Gentilini A, Cecchi C, Manao G, Cappugi G. Purification, kinetic properties and primary structure of bovine erythrocyte acylphosphatase. Ital J Biochem. 42(4):233-45, 1993.
